血液肿瘤是一种高度异质性疾病，大部分患者经过治疗后可以达到完全缓解。血液学完全缓解后，患者的骨髓、外周血或其他髓外组织中仍然存在着少量的白血病细胞，称为微小残留病（measurable residual disease，MRD）。MRD在血液肿瘤复发预测，疗效评估方面发挥着十分重要的作用（图1），白血病细胞负荷越高，复发风险越大，药物疗效越差。

图1 MRD监测在白血病复发预测中的意义

 目前的MRD监测方法主要有多参数流式细胞术（multiparameter flow cytometry，MFC）、荧光实时定量聚合酶链式反应（quantitative polymerase chain reaction，qPCR）和二代测序（next generation sequencing，NGS）。

白血病细胞具有异常的抗原表达，称为白血病相关免疫表型（leukemia-associated immunophenotypes，LAIPs）。LAIPs分为抗原非同步表达、抗原的跨系表达、正常抗原表达强度改变和抗原表达缺失4类。流式细胞术以LAIPs为基础进行MRD监测。

MFC监测MRD的适用范围广，检测周期短，特异性高，但是监测指标缺乏标准化，需要专业分析人员，且治疗后的残留白血病细胞免疫表型可能发生改变（抗原漂移），造成假阳性或假阴性。

正常细胞与血液肿瘤细胞具有不同的分子生物学异常，正常细胞中不表达或低表达的mRNA转录本在白血病细胞中呈现高表达，例如急性髓系白血病患者中的WT1高表达，正常B/T淋巴细胞的IG/TCR重排多样化，B/T细胞淋巴瘤的IG/TCR重排单一化（图2）；血液肿瘤细胞中还存在基因突变和基因融合。在具有基因突变、融合、过表达和重排的血液肿瘤患者中，可采用qPCR技术进行MRD监测。

qPCR灵敏度高，特异性好，监测速度快，但是覆盖面窄，需要多种不同的引物和探针，且受扩增效率和背景表达的影响较大。由qPCR发展而来的液滴数字PCR属于绝对定量方法，可检测基线复杂和含量极低的核酸序列，但也存在覆盖面窄，标志物多等局限性。

图2 正常细胞与B/T肿瘤细胞基因重排

血液肿瘤患者体内经常存在多个突变，而qPCR技术通量低，一般一次只能检测一个外显子突变。NGS技术通量高，可同时检测多个突变，提高效率的同时也能更全面地了解患者的遗传信息。然而，NGS的检测费用较高，还可能引入一些原始样本基因组并不存在的错误，导致假阳性。因此，检测实验室应建立标准化实验和数据解读流程，提高检测的准确率。

MRD监测技术的发展迅速，临床应用也趋于常规。目前的MRD监测方法较多，每种方法都有各自优点和局限性（表1）。血液肿瘤相关诊疗指南推荐，在治疗的多个阶段多频次进行MRD监测，包括诱导治疗完成后、巩固治疗期间、移植前、全部治疗完成后，从而更好地了解白血病的动态变化、更精确地进行风险评估，辅助治疗方案选择。

表1 MRD监测方法的特点

由于每个患者白血病细胞的特异标志不尽相同，加之白血病细胞还带有很多正常细胞的标志以逃脱机体的免疫监视。因此，如何确定白血病细胞特有的标志最为关键。MRD监测的前提是在初诊时找到患者白血病细胞特有的标志，例如，采用流式细胞学方法，首先要在初诊时分析白血病细胞的十几种标志，然后找出几种标志的特定组合作为该白血病细胞的特有标志，后续进行追踪观察。

参考文献

1. van Dongen JJ, van der Velden VH, et al. Minimal residual disease diagnostics in acute lymphoblastic leukemia: need for sensitive, fast, and standardized technologies. Blood, 2015, 125(26): 3996-4009.

2. Ye B, Smerin D, et al. High-throughput sequencing of the immune repertoire in oncology: applications for clinical diagnosis, monitoring, and immunotherapies. Cancer lett., 2018, 416: 42-56.

3. Schnittger S, Kern W, et al. Minimal residual disease levels assessed by NPM1 mutation-specific RQ-PCR provide important prognostic information in AML. Blood, 2009, 114(11): 2220-2231.

4. Roloff GW, Lai C, et al. Technical advances in the measurement of residual disease in acute myeloid leukemia. J Clin Med, 2017, 6(9): 87.