NGS检测结果显示，新诊断的482例患者中，430例（89.2%）至少携带一种突变，每个人平均携带2.9个突变，最常见的突变为NPM1、DNMT3A、FLT3和NRAS（图1A）。430例患者初诊和CR期的2次NGS检测结果显示，51.4%的患者在CR期突变持续存在，且突变等位基因频率存在很大的差异（0.02%~47%，图1B）。DTA（DNMT3A、TET2、ASXL1）突变最常见，频率通常高于2.5%，与白血病幼稚细胞的比例不一致（<5%）；反之，IDH1、IDH2、STAG2、TP53和其他基因突变偶有突变频率高于2.5%的持续存在，这些基因突变频率的改变与形态学CR状态基本一致。DTA突变通常与年龄相关的克隆性造血相关，持续的DTA突变可能代表了非白血病克隆。在初诊时同时存在DTA和非DTA突变的133例患者中，CR期非DTA突变一般被清除，但其中90例患者（67.7%）在CR期通常仍可检测到DTA突变，该结果与CR期带有DTA突变的残余细胞代表非白血病克隆而非持续性恶性疾病的观点一致。

图1初诊和CR期的基因突变（A）以及CR期的突变等位基因频率（B）

持续的DTA突变与4年的复发率没有显著的相关性。然而，在CR期持续存在DTA突变的患者中，同时持续存在非DTA突变对AML复发具有较高的预测价值（4年复发率，检测到的为66.7%，未检测到的 39.4%；P = 0.002），是预后评估的独立指标（图2A）。随后，研究者评估了持续存在的非DTA突变与复发风险的关系，发现任何等位基因频率的非DTA突变的持续存在都与AML的复发风险增加密切相关（4年复发率，检测到的为55.7%，未检测到的为34.6%；P=0.001），无复发生存率（4年无复发生存率56.7%，无复发生存率36.6%；P=0.006）和总生存率降低（4年总生存率，检测到的65.3%，未检测到43.7%；P=0.001）密切相关（图2B）。

为了评估结果的可重复性，研究者对另一队列进行非DNA突变与复发率、无复发生存率和总生存率关系的验证，二者的结果一致（图2B，2C）。在试验组和验证组的430名患者中，28.4%的患者在CR期检测到持续存在的非DTA突变。

图2 持续存在DTA突变患者的复发率（A），所有患者的复发率（B）和总生存率（C）

目前，流式细胞术在CR期AML患者复发预测方面的应用日益增多。研究者通过对340例患者进行NGS和流式细胞检测，比较NGS非DTA突变和流式MRD阳性的一致性。结果显示，69.1%的患者的检测结果一致（30例检测到残留，205例未检测到残留），而64例患者仅NGS检测到持续性非DTA突变，41例患者仅在流式细胞术中检测到MRD阳性。在两种方法检测均为阳性的患者中，4年复发率为73.3%；仅测序的阳性患者中，4年复发率为52.3%；仅流式检测阳性的患者中，4年复发率为49.8%。两种方法检测均阴性的患者中，4年复发率为26.7%（图3）。因此，联合使用NGS和流式细胞术进行MRD监测，对于AML患者的疾病复发、无复发生存和总生存率具有独立的预后价值。

图3 NGS和流式细胞术用于MRD监测的复发预测效能

针对482例AML患者（初诊与CR期）的靶向NGS检测结果显示，89.2%的患者至少携带一个基因突变，51.4%初诊突变阳性的患者在CR期突变持续存在，其中DTA突变（DNMT3A、TET2和ASXL1基因）等位基因频率较高，DTA突变常与年龄相关的克隆性造血相关，但CR期的DTA突变与4年复发率增加无关。因此，DTA突变不是AML患者合适的MRD监测指标，而非DTA突变的持续存在是AML患者复发和生存的独立预后不良因素。NGS与流式细胞检测联合用于AML患者的MRD检测有更显著的预后预测价值。

参考文献：

Jongen-Lavrencic M, Grob T, Hanekamp D, et al. Molecular minimal residual disease in acute myeloid leukemia[J]. New England Journal of Medicine, 2018, 378(13): 1189-1199.